單細胞凝膠熒光檢測細胞凋亡
點擊次數(shù)：1427 更新時間：2016-08-08
以來人們一直認為不同種類的抗生素通過結合不同的作用靶點和各異的作用機制發(fā)揮殺菌作用。如 β-內(nèi)酰胺類抗生素在單細胞凝膠電泳分析(SCGE)是在單細胞水平進行DNA損傷和修復檢測的熒光檢測方法，具有簡單、快速、靈敏和原位等特點。因其細胞電泳形狀頗似彗星，又稱彗星試驗(comet Etssay)。
低熔點瓊脂糖凝膠將細胞包埋于載玻片上，細胞裂解液破壞細胞膜、核膜及其他生物膜，細胞內(nèi)RNA、蛋白質(zhì)及其他成分進入凝膠，繼而擴散至裂解液中，而核DNA仍原位附著于核骨架。如果細胞未受損傷，因核DNA分子量大，電泳中停留于原位，經(jīng)熒光染色后呈現(xiàn)圓形的熒光團，無拖尾現(xiàn)象。
若細胞受損，在堿性電泳液(pH>13)中，DNA雙鏈解螺旋且堿變性為單鏈，單鏈斷裂的小分子量DNA碎片進入凝膠，向陽極遷移，形成拖尾。細胞核DNA損傷愈嚴重，產(chǎn)生的斷鏈或堿變性片段愈多，其片段愈??；電場作用下遷移的DNA量多，遷移的距離長，熒光顯微鏡下可觀察到尾長增加和尾部熒光強度增強。一定條件下，DNA遷移距離(彗星尾長)和DNA古量(熒光強度)分布與DNA損傷程度呈線性相關。
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